基本信息 智立编码：202112410115140232 又名: pCDFDuet1 启动子: T7 复制子: CDF 感受态: DH5a 培养温度: 37度 质粒属性 质粒宿主： 大肠杆菌 质粒用途： 卵白抒发 片断类型： ORF 片断物种： 多框空载 原核抗性： Str
pCDFDuet™-1是为两个观念ORF的共抒发而想象的。该载体包含两个多克隆位点（MC），每个位点前边都有一个T7lac启动子和核糖体都集位点（rbs）。该载体还佩戴CloDF13繁衍的CDF复制子、lacI基因和链霉素/大不雅霉素抗性基因（SmR）。该向量可与PacyDuet都集使用™-1（分类号71147-3），pRSFDuet™-1（分类号71341-3）和宠物二重唱™-1（目次号71146-3）在适应的宿主菌株中，共抒发4到8个观念卵白。插入MCS1的ORF不错使用ACYCDuetUP1引物（分类号71178-3）和DuetDOWN1引物（分类号71179-3）进行测序。插入MCS2的ORF不错使用DuetUP2引物（分类号71180-3）和T7休止子引物（分类号69337-3）进行测序。专有的场所袒露在圆形舆图上。智立中特（武汉）生物科技有限公司是一家集生物研发，坐褥，销售，售后为一体的高新时刻产业公司。领有载体质粒，载体，国表里微生物菌种资源，感受态细胞，培养基，细胞株等平时的坐褥销售线。质粒菌株居品操作表示书扩增历程收到居品后，请先阐述居品管壁标签来判断居品样子，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。1、质粒干粉（常温运载，存于-20度91porn,com，90天保质期91porn,com，请务必先鼎新提质粒后使用）①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μlddH2O去离子水融化质粒；②取1支100μl感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅拌，再冰浴2min；（从第二步开动均要在超净责任台中无菌操作）③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm颤动37℃培养45min；④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌千里淀，并涂布至观念质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，不错比传统涂布设施得到更多鼎新子）⑤将平板正向培养1h，再畸形37℃培养14h。要是条件是30度则培养20h；（菌落过多则将质粒稀释后再鼎新。莫得菌落则加入10μl质粒鼎新。另外不要径直转抒发感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入抒发感受态）⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm颤动培养14h，阐述实践需要和质粒索求试剂盒表示书索求质粒。2、甘油菌种（冰袋运载，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）四区画线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区画线，再挑单菌落液体培养。3、穿刺菌种（冰袋运载，存于4℃，保质期7天）穿刺接种，液体培养后四区画线，再挑单菌落液体培养。4、菌落平板（冰袋运载，存于4℃，保质期7天）径直挑取单菌落至液体培养基中。5、液体质粒（冰袋运载，存于-20℃，保质期90天）单独索求的液体质粒收到后可径直使用。6、滤纸质粒（常温运载，存于-20度，保质期90天，请务必先鼎新提质粒后使用）收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒鼎新，离心全涂。迎接走访质粒载体网，本站附庸于智立中特（武汉）生物科技有限公司，官方网址www.zlzt.com公司具备超净责任台、生物安全柜、-86℃超低温雪柜、高压灭菌锅，高速大型离神思，超低温离神思，生化培养箱等专科仪器开发，同期领有多名恒久从事分子生物询查的责任主说念主员，不错快速灵验的匡助众人生物科研责任者共享和获取有关居品。公司培植于今就业广泛包括众多生命科研客户，包括北大清华中国农业大学等高校，中日友好病院，摆脱军总病院等病院，中科院，军科院，农科院等科研机构和一些队列单元。通过居品研发的握住立异，就业质地握住擢升，赢得了众多生命科研用户的信托。并为工业农业等范畴擢升微生物居品和时刻处分有打算从而成为实在赖相助伙伴。质粒载体居品：提供多样类型载体宿主，基因种属类型，抗性，想象并构建质粒：大肠杆菌抒发载体；哺乳动物抒发载体；酵母抒发载体；虫豸抒发载体；植物抒发载体；广;腺病毒载体...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(东说念主基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及都集转移质粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663质粒菌种居品：E.coliNissle1917；USA300：大肠杆菌JM108；希瓦氏菌属MR-1；E.coliW3110野生型；酿酒酵母W303a；酿酒酵母invsc1；酿酒酵母BY4741；酿酒酵母BY4742；毕赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢杆菌WB800；根癌农杆菌EHA105；根癌农杆菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐药鲍曼不动杆菌；哈维弧菌BB170菌种居品：提供形式菌种，科研菌种，普通菌种等菌种资源，有证质控样品等微生物圭臬品，芽孢悬液。常用药典菌种如：大肠埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501,铜绿假单胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus），类干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；灵芝，香菇，茯苓等原代细胞和细胞系居品：现取不同组织现分：不同着手东说念主/鼠/兔/猪等不同组织如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、前哨腺、腹黑、血管。常用原代细胞有：气管上皮细胞；前哨腺上皮细胞；膀胱上皮细胞；输尿管上皮细胞；肾足细胞；内皮祖细胞；输卵管上皮细胞；乳腺上皮细胞公司提供细胞系东说念主源作念过STR自便，其他作念过种属自便，确保居品无误后方可提供客户，样子冻存或复苏省俭客户时刻；确保实践胜利。常用细胞系有：WB-F344细胞；RG2[D74]细胞；NRK细胞；A7r5细胞；L6细胞；UMNSAH/DF-1细胞；MDBK(NBL-1)细胞；MDBK细胞；CCC-SMC-1细胞；PtK1(NBL-3)细胞；Mv1Lu细胞；Mv.1.Lu(NBL-7)细胞；F81细胞；CRFK细胞；MLTC-1细胞；MS1细胞；C3H/10T1/2,Clone8细胞；GL261细胞；P3X63Ag8.653细胞；HCC38细胞；ZR-75-30细胞；SK-LU-1细胞；NCI-H2087细胞；SK-N-MC细胞；Hs895.T细胞
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