一、细胞简介：
细胞称号：HCMEC/D3长生化东谈主脑微血管内皮细胞 平台编号:zl-056213
东谈主脑微血管内皮细胞是东谈主微血管内皮细胞通过含端粒酶逆转录SV40T慢病毒转染得回。
细胞特质
1）开头：东谈主脑微血管
2）形态：细胞呈梭状，细长型
3）含量：>1x106个/mL
4）抑制：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25瓶大意1mL冻存管包装
二、细胞培养设施
培养基及培养冻存条款准备：
1）准备内皮细胞专用基础培养基；优质胎牛血清，5%；添加对应因子1%；双抗，1%。
2）培养条款：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
1）冻存细胞：冻存细胞时，用FBS重悬细胞，然后加入一定量的DMSO，轻轻羼杂均匀后移入到冻存管中，DMSO终浓度为10%。
三．细胞责罚：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中速即摇晃解冻，离心管加入4mL培养基羼杂均匀。在800-1000RPM条款下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将通盘细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。
2）细胞传代：若是细胞密度达80%，即可进行传代培养。
关于贴壁细胞，传代可参考以下要领：
1.弃去培养上清探花 porn，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中探花 porn，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下不雅察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并零星，速即拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml此细胞的培养基远离消化。
3.轻轻奏乐后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条款下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。
4.收到细胞后初度传代保举将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中大意瓶中，提倡冻存一支备用，后续传代凭证现实情况按1:2到1:4的比例进行。
3）细胞冻存：待细胞滋长状态考究时，可进行细胞冻存。
底下T25瓶为例；
1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1-2ml胰酶（含EDTA），细胞变圆零星后，加入2-3ml含血清的培养基远离消化，可使用血球计数板计数。
2，4min1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，凭证细胞数目加入血清和等体积的冻存液，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10E6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，精通冻存管作念好符号。
3，将冻存管置于范例降温盒中，放入-80度雪柜，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记载冻存管位置以便下次拿取。
四、运输和保存
可采纳干冰运输及发送复苏存活细胞时势
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮大意-80度雪柜冻存或顺利复苏；
（2）存活细胞，收到后应陆续滋长，传代达到细胞滋长状态考究时，再进行冻存。具体操作见细胞培养设施。
（3）收到细胞后请拍照，3天内若是发现抑制，请实时拍照与咱们研讨。
细胞用途：仅供科研使用。
五、细胞接纳后的责罚：
1）收到细胞后，请搜检发货培养瓶的景色，若发现培养瓶破碎、有液溢出及细胞有抑制，请拍照后实时研讨咱们。
2）在显微镜下阐述细胞滋长状态时，最佳在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同期给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外不雅相片一张留存，当作细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3）不雅察好细胞状态后，75%乙醇消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放手约2-3h。
4）贴壁细胞：在运输流程中贴壁细胞会有零星的局面，如发现贴壁细胞有零星大意零星后抱团滋长，可将T25瓶置于37℃培养箱放手约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照讲解书细胞培养条款新配制的富饶培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。
5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放手约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照讲解书细胞培养条款新配制的富饶培养基）。
6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不可再用来培养细胞，请换用按照讲解书细胞培养条款新配制的富饶培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代提倡1：2传代。
智立中特（武汉）生物科技有限公司是一家集生物研发，分娩，销售，售后为一体的高新时间产业公司。领有载体质粒，载体，国表里微生物菌种资源，感受态细胞，培养基，细胞株等泛泛的分娩销售线。
质粒载体产物：
提供多样类型载体宿主，基因种属类型，抗性，盘算并构建质粒：大肠杆菌抒发载体；哺乳动物抒发载体；酵母抒发载体；虫豸抒发载体；植物抒发载体；广;腺病毒载体...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(东谈主基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24
pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9
pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及聚合转机质粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663
质粒菌种产物：
E.coliNissle1917；USA300：大肠杆菌JM108；希瓦氏菌属MR-1；E.coliW3110野生型；酿酒酵母W303a；酿酒酵母invsc1；酿酒酵母BY4741；酿酒酵母BY4742；毕赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢杆菌WB800；根癌农杆菌EHA105；根癌农杆菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐药鲍曼不动杆菌；哈维弧菌BB170
菌种产物：
提供模式菌种，科研菌种，已往菌种等菌种资源，有证质控样品等微生物模范品，芽孢悬液。常用药典菌种如：大肠埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501,铜绿假单胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus），类干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；灵芝，香菇，茯苓等
原代细胞和细胞系产物：
现取不同组织现分：不同开头东谈主/鼠/兔/猪等不同组织如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、前哨腺、腹黑、血管。常用原代细胞有：气管上皮细胞；前哨腺上皮细胞；膀胱上皮细胞；输尿管上皮细胞；肾足细胞；内皮祖细胞；输卵管上皮细胞；乳腺上皮细胞
公司提供细胞系东谈主源作念过STR刚毅，其他作念过种属刚毅，确保产物无误后方可提供客户，样式冻存或复苏从简客户时候；确保实验班师。常用细胞系有：WB-F344细胞；RG2[D74]细胞；NRK细胞；A7r5细胞；L6细胞；UMNSAH/DF-1细胞；MDBK(NBL-1)细胞；MDBK细胞；CCC-SMC-1细胞；PtK1(NBL-3)细胞；Mv1Lu细胞；Mv.1.Lu(NBL-7)细胞；F81细胞；CRFK细胞；MLTC-1细胞；MS1细胞；C3H/10T1/2,Clone8细胞；GL261细胞；P3X63Ag8.653细胞；HCC38细胞；ZR-75-30细胞；SK-LU-1细胞；NCI-H2087细胞；SK-N-MC细胞；Hs895.T细胞
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